1 基本說明

Stbl2菌株來源于 JM109 E. coli strain，適合克隆不穩(wěn)定插入片段 (正向重復序列，逆轉錄病毒序列等)； mcrA突變和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列；同時Stbl2也可用于慢病毒載體的構建。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA的提取。不存在lacIqZΔM15，不可用于藍、白斑篩選。Stbl2感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19檢測轉化效率可達109 cfu/μg DNA。

2 基因型：

F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB) 

3 儲存及使用環(huán)境

本產(chǎn)品應保存在-80℃，不可反復凍融或放置時間過長，否則會降低轉化效率。

進行轉化過程中，請根據(jù)相應溫度及無菌條件的要求進行。

操作方法

1. Stbl2感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質粒或連接產(chǎn)物) 并用手撥打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養(yǎng)基(S.O.C.營養(yǎng)豐富，可提高轉化效率)。

4. 37℃，225 rpm復蘇60分鐘或30℃，225 rpm復蘇90分鐘。

(當質粒中含有不穩(wěn)定片段時，30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組的概率，若轉化control pUC19計算轉化效率，則需37℃，225 rpm復蘇60分鐘）

5. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C.或LB培養(yǎng)基上。

6. 將平板倒置放于37℃或30℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

(當質粒中含有不穩(wěn)定片段時，30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組的概率，若轉化control pUC19計算轉化效率，則需37℃培養(yǎng)過夜)

注意事項

1. 感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質?；蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少最終用于涂板的菌量。

4. S.O.C.或LB培養(yǎng)基均可使用，S.O.C.可提高轉化效率20%；實驗人員可選擇在37℃或30℃培養(yǎng)細胞，37℃條件下，菌生長速度加快，有利于提高質粒產(chǎn)量，30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組概率。